Maaari mo ring i-des alt ang iyong sample sa pamamagitan ng ultrafiltration sa 1 tenth ng nakaraang volume, na muling magtunaw at ulitin ang UF step. Ang pinakamahusay na paraan para sa des alting ay des alting sa pamamagitan ng gel filtration laban sa 50 mM buffer, kaysa sa ultrafiltration (classical, hindi centrifugal).
Ano ang des alting sa pagdalisay ng protina?
Ginagamit ang pag-des alting upang alisin ang mga s alts mula sa mga solusyon sa protina, phenol o unincorporated nucleotides mula sa mga nucleic acid o sobrang crosslinking o labeling reagents mula sa conjugated proteins.
Paano mo nililinis ang mga protina?
Sa bulk na purification ng protina, ang karaniwang unang hakbang para ihiwalay ang mga protina ay precipitation na may ammonium sulfate (NH4) 2SO4. Ito ay ginagawa sa pamamagitan ng pagdaragdag ng dumaraming dami ng ammonium sulfate at pagkolekta ng iba't ibang fraction ng precipitated protein. Kasunod nito, maaaring alisin ang ammonium sulfate gamit ang dialysis.
Paano ka buffer ng exchange proteins?
Ang
Buffer exchange, gayunpaman, ay ginagawa sa pamamagitan ng unang equilibrating sa column resin na may buffer kung saan dapat mapunta ang sample. Sa parehong mga kaso, ang mga buffer constituent na nagdadala ng sample sa ang column ay papalitan ng solusyon kung saan ang column ay pre-equilibrated.
Alin sa mga sumusunod na chromatography technique ang maaaring ilapat para sa des alting ng mga protina?
Tulad ng nabanggit sa itaas, ang gel filtration ay maaaring epektibong magamit para sa protinades alting at nagagawa sa pamamagitan ng unang equilibrating ang gel filtration column sa tubig. Gayunpaman, ang palitan ng buffer ay nagagawa sa pamamagitan ng unang pag-equilibrate ng column resin sa target na buffer.
