Una sa lahat, parehong nag-iiwan ang EcoR1 at Xba1 ng 5' na overhang kapag natutunaw nila ang DNA (gaya ng ginagawa ng Nde1). Sa parehong mga kaso ang 3' dulo ay recessed na kung saan ang polyermase ay maaaring magdagdag ng mga base. Pangalawa, lahat ng polymerases ay maaari lamang magdagdag ng mga base sa isang 3' dulo, kaya ang Klenow ay magdaragdag ng 4 na base sa umatras na 3' dulo ng parehong site upang bumuo ng mga blunt na dulo.
Nag-iiwan ba ng 5 phosphate ang mga restriction enzymes?
Ang mga vector at insert na natutunaw ng mga restriction enzyme ay naglalaman ng mga kinakailangang terminal modification (5' phosphate at 3' hydroxyl), habang ang mga fragment na ginawa ng Polymerase Chain Reaction (PCR) ay maaaring hindi.
Maaari bang itali ang mga blunt ends?
Ang
Blunt-end ligation
Blunt end ligation ay hindi kinasasangkutan ng base-pairing ng mga nakausli na dulo, kaya anumang mapurol na dulo ay maaaring ikabit sa isa pang blunt na dulo. Maaaring mabuo ang mga mapurol na dulo ng mga restriction enzymes gaya ng SmaI at EcoRV.
Ang Taq polymerase ba ay gumagawa ng mga blunt ends?
Oo… Nagdaragdag ang Taq Polymerase ng A-Overhangs kung pananatilihin mo ang panghuling hakbang ng extension sa 72 dC sa PCR. Kadalasang ginagamit para sa TA Cloning.
Bakit gagamitin ang Klenow fragment sa DNA sequencing?
Ang fragment ng Klenow ay lubhang kapaki-pakinabang para sa mga gawaing nakabatay sa pananaliksik gaya ng: Synthesis ng double-stranded DNA mula sa mga single-stranded na template . Pagpupuno sa mga umuurong na 3' dulo ng mga fragment ng DNA upang maging 5' overhang na mapurol . Natutunaw ang nakausli na 3' overhang.
