Kung mas malaki ang molecular weight, mas mahaba ang coil at mas mabagal ang molecule. Kaya, ang electrophoresis + SDS ay naghihiwalay batay sa timbang ng molekula, hindi sa batayan ng katutubong singil. Mahalagang tala: Ang mga protina na may parehong haba ay karaniwang hindi maaaring paghiwalayin ng gel electrophoresis + SDS.
Paano mo pinaghihiwalay ang mga protina ng parehong molekular na timbang?
Ang
Centrifugation, electrophoresis, at chromatography ay ang pinakakaraniwang mga diskarte para sa paglilinis at pagsusuri ng mga protina. Ang centrifugation ay naghihiwalay sa mga protina batay sa kanilang rate ng sedimentation, na naiimpluwensyahan ng kanilang masa at hugis.
Aling mga diskarte ang naghihiwalay sa mga protina batay sa bayad?
Ang mga protina ay maaaring paghiwalayin batay sa kanilang netong singil sa pamamagitan ng ion-exchange chromatography. Kung ang isang protina ay may netong positibong singil sa pH 7, karaniwan itong magbubuklod sa isang hanay ng mga butil na naglalaman ng mga pangkat ng carboxylate, samantalang ang isang negatibong sisingilin na protina ay hindi (Figure 4.4).
Alin sa mga sumusunod na diskarte ang pinakaangkop para sa paghihiwalay ng mga protina batay sa timbang ng molekula?
Ang mga pamamaraan ng Chromatography batay sa partition ay napakaepektibo sa paghihiwalay, at pagkilala sa maliliit na molekula bilang mga amino acid, carbohydrates, at fatty acid. Gayunpaman, ang affinity chromatography (ie. ion-exchange chromatography) ay mas epektibo sa paghihiwalay ng mga macromolecule bilang nucleic acid, at mga protina.
Aling uri ng columnpinaghihiwalay ng chromatography ang mga protina batay sa bigat ng molekular?
Ang
Gel filtration (GF) chromatography ay naghihiwalay ng mga protina batay lamang sa laki ng molekular. Nagagawa ang paghihiwalay gamit ang isang porous na matrix kung saan ang mga molekula, para sa mga steric na dahilan, ay may iba't ibang antas ng pag-access--ibig sabihin, ang mas maliliit na molekula ay may mas malaking access at ang mga mas malalaking molekula ay hindi kasama sa matrix.
