Gayunpaman, kapag nag-overlap ang emission spectra, maaaring matukoy ang fluorescence mula sa higit sa isang fluorochrome. Upang itama ang parang multo na overlap na ito, ginagamit ang isang proseso ng fluorescence compensation. Tinitiyak nito na ang natukoy na fluorescence sa isang partikular na detector ay nagmumula sa fluorochrome na sinusukat.
Bakit kailangan natin ng kabayaran sa flow cytometry?
Kinakailangan ang kompensasyon para sa isang eksperimento ng flow cytometry dahil sa physics ng fluorescence. Ang isang fluorochrome ay nasasabik, at naglalabas ng isang photon sa isang hanay ng mga wavelength. Ang ilan sa mga photon na iyon ay tumalsik sa pangalawang detektor, na nagsasanhi sa mga sample na nag-iisang may batik na lumitaw na dobleng positibo.
Ano ang pangunahing layunin ng paggamit ng compensating cell?
Ang pangunahing layunin ay upang payagan ang pagsukat ng tunay na fluorescence sa pangunahing channel na kontaminado ng spillover mula sa mga katabing fluorophores. Samakatuwid, ang kabayaran ay nagwawasto para sa fluorescence na "trespass" sa pagitan ng mga fluorophores. Gayunpaman, hindi ito perpekto at hindi maaayos ang lahat ng hindi kanais-nais na epekto.
Ano ang compensation matrix?
Ang compensation matrix ay kinakalkula gamit ang iisang kulay na fluorescent control file na kinokolekta sa ImageStream o FlowSight kasama ang lahat ng channel na nakolekta at sa kawalan ng brightfield illumination o SSC.
Ano ang spectral compensation?
Gumagamit ng spectralang kabayaran ay nangangahulugan na ang signal mula sa mga hindi pangunahing detector ay ginagamit pa rin upang pahusayin ang totoong signal ng mga marker kung saan posible. Ang pangunahing mga sample ng kontrol ay ginagamit para sa pagpapangalan ng parameter. … Nakakatulong din ang mga sample na ginamit para sa mga pangunahing detector na pangalanan ang mga parameter na iyon pagkatapos ng spectral compensation.
