Kapag lumabas ang mga cell na hiwalay, magdagdag ng 2 volume ng pre-warmed complete growth media upang i-inactivate ang trypsin. Dahan-dahang i-disperse ang medium sa pamamagitan ng pag-pippet sa ibabaw ng cell layer nang ilang beses upang matiyak ang pagbawi ng >95% ng mga cell.
Paano ko ititigil ang aktibidad ng trypsin?
Ang pagtunaw ng trypsin ay maaaring ihinto sa pamamagitan ng pagyeyelo o sa pamamagitan ng pagpapababa ng pH ng reaksyon sa ibaba ng pH 4 sa pamamagitan ng pagdaragdag ng formic, acetic, o trifluoroacetic acid (magbabalik ang trypsin sa aktibidad kapag ang Ang pH ay itinaas sa itaas ng pH 4). Maaaring iimbak ang mga natutunaw na sample sa -20°C.
Ano ang nagne-neutralize sa trypsin?
Ang buffer naglalaman ng mga calcium at magnesium ions ay magpapabagal din sa aktibidad ng trypsin. Gayunpaman, ang FBS ay ang mas epektibong paraan upang pigilan ang aktibidad ng trypsin.
Inactivate ba ng serum ang trypsin?
Inactivate ng serum ang natitirang trypsin mula sa enzymatic digestion ng mga kidney at ang proteolytic enzymes na kasunod na na-synthesize ng mga cell. Ang mga bagong trypsinized na cell ay maaaring lumaki sa mga monolayer kung walang serum basta't paulit-ulit silang hinugasan upang alisin ang natitirang trypsin.
Gaano karaming media ang kinakailangan upang i-deactivate ang trypsin?
Hangga't gumagamit ka ng hindi bababa sa 1:1 ratio ng 5-10% serum-naglalaman ng medium kasama ng iyong trypsin dapat mayroong higit sa sapat na pagsugpo, na sinusundan ng centrifugation at medium exchange na may sariwang medium.
